产品货号：
GL1913
中文名称：
丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)
英文名称：
产品规格：
120T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
检测原理：
背景资料：
产品组成：
保存：按标签指示条件保存，有效期6个月。
用户自备：
蒸馏水、水浴锅或恒温箱、96孔UV板、全波长酶标仪或自动分析仪、离心管或小试管。
注意事项：
使用方法：
计算方法：
相关搜索：丙酮酸检测试剂盒(乳酸脱氢酶微板法)，丙酮酸检测，乳酸脱氢酶法
本制品是百奥莱博公司基于乳酸脱氢酶微板法开发的，专门用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液、血浆、血清等样品中内源性的丙酮酸含量的试剂盒。
检测原理：
在NADH存在条件下，乳酸脱氢酶(LDH)催化丙酮酸氧化，生成乳酸和NAD+，在弱碱性条件下平衡偏向丙酮酸氧化为乳酸的方向驱动反应，通过酶标仪测定340nm处NADH吸光度的下降速率，计算出丙酮酸含量。
背景资料：
丙酮酸(Pyruvic acid，PA)又称2-氧代丙酸，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一，可通过乙酰辅酶A和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用；丙酮酸和乳酸是糖无氧代谢的产物，科研工作者常将二者一起研究，并用二者的比值推算循环衰竭的程度，丙酮酸检测可采用乳酸脱氢酶催化法、二硝基苯肼法等。二硝基苯肼法是比较古老的方法，生成有色物质，易于观察，但易受α-酮酸的干扰，特异性差，操作烦琐，目前首选方法是乳酸脱氢酶催化法。
产品组成：
| 组分 | 规格 | 保存 | |
| 试剂(A):丙酮酸标准 | 22mg | RT | |
| 试剂(B):丙酮酸标准稀释液 | 5mL | ||
| 试剂(C): PA显色液 | C1:PA Assay Buffer | 33mL | |
| C2:NADH | 1支 | -20℃，避光 | |
| 试剂(D):LDH Solution | 0.48mL | ||
保存：按标签指示条件保存，有效期6个月。
用户自备：
蒸馏水、水浴锅或恒温箱、96孔UV板、全波长酶标仪或自动分析仪、离心管或小试管。
注意事项：
- 本法适用于自动分析仪，分别测定管和标准管的吸光度升高速率，计算乳酸的浓度；如果采用自动分析仪，该120T试剂盒可检测约100次。
- 配制好的PA显色液，4℃保存，36h有效。
- 配制好的PA-LDH显色液，4℃保存，24h有效。
- 如果没有酶标仪也可以使用分光光度计测定，我们推荐采用分光光度计，以使操作系统误差减小到最少；一次不应检测过多样品，以免因为时间误差而导致结果差异较大。
- 抗凝剂用肝素钠-氟化钠较好，抗凝血样品置于冰浴中送检，尽快分离出血浆等。
- 草酸抗凝剂对LDH有一定的抑制作用。
- 采用乳酸脱氢酶法检测丙酮酸时，一般不建议采用微板法，这是由于手工操作差异较大，尤其是该法对操作时间要求极其严格，操作难以标准化、统一化，检测结果不稳定。
- 试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。
- 本试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。
使用方法：
- 准备样品：
- 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。
- 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，-20℃冻存，用于PA的检测。
- 高浓度样品：如果样品中含有较高浓度的PA，可以使用原有的裂解液或PBS等进行稀释，如鸡血清、血浆可稀释5～10倍后检测。
- 血浆、血清、尿液及其他体液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，-20℃冻存。
- 配制标准品工作液：取丙酮酸标准1支，准确加入丙酮酸标准稀释液1mL，充分混匀，即配制成丙酮酸标准(100mmol/L)，4℃保存备用。临用前，按丙酮酸标准(100mmol/L)：丙酮酸标准稀释液=1：199的比例混合，即为标准品工作液-丙酮酸标准(0.5mmol/L)；4℃避光保存，24h有效。
- 配制PA显色液：取一支NADH加蒸馏水1mL溶解，-20℃保存，7d有效。临用前，按PA Assay Buffer：NADH水溶液=50：1的比例混合，即为PA显色液，4℃保存，36h有效。
- 配制PA-LDH显色液(仅适用于自动分析仪)：取配制好的PA显色液9.6mL与LDH Solution 0.15mL混匀，即为PA-LDH显色液；4℃避光保存，24h有效。
- 酶标仪测定：按照下表设置空白孔、标准孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡；如果样品中的PA浓度过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行孔。
成分(μL) 空白孔 标准孔 测定孔 蒸馏水 24 — — 待测样品(血清、血浆、体液等) — — 24 丙酮酸标准(0.5mmol/L) — 24 — PA显色液 256 256 256 充分混匀，蒸馏水调零，于340nm处读取空白孔、标准孔、测定孔的吸光度，分别记为A空白1、A标准1、A测定1。 LDH Solution 4 4 4 室温孵育1min，酶标仪立即测定340nm吸光度，分别为A空白2、A标准2、A测定2，此后每隔1min读1次吸光度，直至读数稳定，分别为A空白x、A标准x、A测定x。 - 自动分析仪测定：样品中的PA浓度过高，可以减少样品用量或稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置平行管；根据实验室的自动分析仪性能设置参数如下供参考：
分别检测待测样品管吸光度的下降速率(ΔAu/min)和标准管吸光度的下降速率(ΔAs/min)。温度 37℃ 延迟时间 30s pH 7.4 检测时间 120s 波长 340nm 待测样品/丙酮酸标准(0.5mmol/L)体积 25μL PA-LDH显色液 275μL
计算方法：
- 酶标仪比色计算公式：
丙酮酸(mmol/L)={(ΔA测定-ΔA空白)/(ΔA标准-ΔA空白)}×0.5
也可根据NADH毫摩尔吸光度计算：
丙酮酸(mmol/L)=(ΔA测定-ΔA空白)×0.284×D/(6.22×0.024)
ΔA测定=A测定1-A测定x
ΔA空白=A空白1-A空白x
ΔA标准=A标准1-A标准x
D=稀释倍数
0.284=反应液的总体积(mL)
6.22=NADH毫摩尔吸光度
0.024=待测样品体积(mL)
换算公式：丙酮酸(mg/dL)=丙酮酸(mmol/L)×8.8 - 自动分析仪计算公式：
血清、血浆、尿液、脑脊液丙酮酸(mmol/L) ={(ΔAu/min)/(ΔAs/min)}×0.5
组织丙酮酸(mmol/g) ={(ΔAu/min)/(ΔAs/min)}×{(0.5/待测样品蛋白浓度(g/L)}
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